細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是一種快速簡便的自動化細(xì)胞數(shù)量和活率測量裝置，目前主要通過基于顯微圖像的圖像識別法和基于阻抗的電阻抗計(jì)數(shù)法。

基于顯微圖像的圖像識別法，通常通過臺盼藍(lán)染色或AO/PI等熒光染料染色，整合先進(jìn)的光學(xué)成像技術(shù)和智能圖像識別技術(shù)，進(jìn)行自動細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測。臺盼藍(lán)是細(xì)胞活性染料，常用于檢測細(xì)胞膜的完整性，以檢測細(xì)胞是否存活。活細(xì)胞的細(xì)胞膜完整，能排斥臺盼藍(lán)，不會被染成藍(lán)色；而死細(xì)胞由于細(xì)胞膜破損或不完整，會被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色，因此可借助臺盼藍(lán)染色進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，區(qū)分死活細(xì)胞。吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）是可以與細(xì)胞核內(nèi)雙鏈DNA結(jié)合的熒光染料。

AO可以自由穿透細(xì)胞膜，嵌入所有細(xì)胞（活細(xì)胞和死細(xì)胞）的細(xì)胞核中發(fā)出綠色熒光；PI只能通過破損的細(xì)胞膜，即死細(xì)胞的細(xì)胞膜，嵌入死細(xì)胞的細(xì)胞核中發(fā)出紅色熒光。當(dāng)兩種染料同時(shí)存在于死細(xì)胞核中時(shí)，會發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致死細(xì)胞發(fā)出紅色熒光。因此可通過AO/PI準(zhǔn)確區(qū)分死活細(xì)胞，進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞計(jì)數(shù)。

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)量校準(zhǔn)以下校準(zhǔn)項(xiàng)目應(yīng)在細(xì)胞計(jì)數(shù)儀經(jīng)過開機(jī)預(yù)熱、儀器達(dá)到正常工作條件后進(jìn)行，校準(zhǔn)前應(yīng)當(dāng)確保儀器工作狀態(tài)正常，參照附錄 A 進(jìn)行校準(zhǔn)原始數(shù)據(jù)記錄。

1 外觀要求用目視并配合手動操作進(jìn)行檢查。儀器外表應(yīng)光滑平整，不應(yīng)有影響工作性能的機(jī)械損傷；顯示屏表面應(yīng)平整潔凈無劃痕，讀數(shù)清晰；開關(guān)及按鍵功能良好。儀器應(yīng)有以下標(biāo)識：名稱、型號、編號、生產(chǎn)廠家、出廠日期。

2 測試前準(zhǔn)備開啟儀器，參照儀器使用說明書，使儀器達(dá)到最佳工作條件。根據(jù)客戶使用要求、被校準(zhǔn)儀器的日常工作模式和選取的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)類型選取合適的細(xì)胞測量模式。

3 空白值 JJF xxxx-xxxx 7取空白稀釋液、純水或蒸餾水進(jìn)行上樣計(jì)數(shù)，測量 4 次，記錄測量值并取其中的最高值作為空白值。

4 示值誤差儀器的示值誤差以細(xì)胞濃度（總細(xì)胞濃度、活細(xì)胞濃度和死細(xì)胞濃度）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、細(xì)胞活率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、顆粒直徑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測量值與標(biāo)準(zhǔn)值的誤差表示。根據(jù)被校準(zhǔn)儀器的日常工作模式選取合適濃度、比例和顆粒直徑的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)前上下顛倒 30-50 次左右從而保證充分混勻（瓶底無沉積物）。用移液器從充分混勻的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣本液體中間層吸取液體進(jìn)行上樣計(jì)數(shù)，測量 5 次，記錄測量值，并按照公式（1）進(jìn)行示值誤差計(jì)算。CiCs（1）式中：—細(xì)胞計(jì)數(shù)器示值誤差，/mL、%或 μm； Ci—5 次測量值的平值，/mL、%或 μmCs—標(biāo)準(zhǔn)值，/mL、%或 μm。

5 測量重復(fù)性儀器重復(fù)性以細(xì)胞濃度（總細(xì)胞濃度、活細(xì)胞濃度和死細(xì)胞濃度）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、細(xì)胞活率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、顆粒直徑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 10 次測量值的實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。根據(jù)被校準(zhǔn)儀器的日常工作模式選取合適濃度、比例和顆粒直徑的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)前上下顛倒 30-50 次左右從而保證充分混勻（瓶底無沉積物）。用移液器從充分混勻的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣本液體中間層吸取液體進(jìn)行上樣計(jì)數(shù)，測量 10 次，記錄測量值，并按照公式

（1）進(jìn)行示值誤差計(jì)算。1( )21nC CSTDnii i

（2）式中：STD-測量值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，/mL、%或 μm； n—測量次數(shù)； JJF xxxx-xxxx 8 Ci —第 i 次測量值，/mL、%或 μm； Ci —測量平均值，/mL、%或 μm。8 校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)經(jīng)校準(zhǔn)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀應(yīng)填發(fā)校準(zhǔn)證書，校準(zhǔn)證書應(yīng)符合 JJF1071-2010 中5.12 的要求，參照附錄 C 給出校準(zhǔn)項(xiàng)目名稱、測量值以及擴(kuò)展不確定度。9 復(fù)校時(shí)間間隔送校單位可根據(jù)實(shí)際情況自主決定細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的復(fù)校時(shí)間間隔，建議不超過1 年。

公司背景介紹：

澤恒.華譜在計(jì)量校準(zhǔn)、驗(yàn)證與確認(rèn)的優(yōu)勢是專注做生物制藥質(zhì)控服務(wù)，針對一些特殊的儀器都非常熟悉，核心團(tuán)隊(duì)來源于制藥公司和儀器廠家，對儀器和GMP法規(guī)都很熟悉，比如：我們團(tuán)隊(duì)專門研發(fā)了替代進(jìn)口的熒光定量PCR儀校準(zhǔn)裝置，大大降低熒光定量/定性PCR儀校準(zhǔn)的成本（遠(yuǎn)低于同行）；我們開發(fā)了細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的校準(zhǔn)內(nèi)部規(guī)程；開發(fā)了細(xì)胞復(fù)蘇儀的內(nèi)部校準(zhǔn)規(guī)程；開發(fā)了凝膠電泳掃描儀的校準(zhǔn)規(guī)程；我們開發(fā)了溫度驗(yàn)證所需要的超低溫和超高溫一體化無線探頭，降低用戶大量使用探頭時(shí)的成本，代替了進(jìn)口；這些例子還有很多，因?yàn)槲覀兌际巧锍錾?，所以我們關(guān)注每一個(gè)生物用戶工藝要求，在生物制藥儀器設(shè)備上面專注，“與質(zhì)量同行、做儀器設(shè)備質(zhì)控"，為了讓生物制藥更安全而努力。

我們在服務(wù)上與其它單位密切合作，包括強(qiáng)檢、特檢或做不了的都幫客戶代送代取，省時(shí)、省力、方便客戶。

澤恒.華譜是專注于為生物制藥行業(yè)提供實(shí)驗(yàn)室儀器計(jì)量校準(zhǔn)、儀器設(shè)備驗(yàn)證與驗(yàn)證/廠房驗(yàn)證的專業(yè)服務(wù)商。我們給制藥客戶解決的是一站式QC/QA/工程部/驗(yàn)證部/生產(chǎn)部的質(zhì)控外包服務(wù)。